技術(shù)原理：
與Southern Blot或Northern Blot雜交方法類似，但Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過SDS-PAGE（聚丙烯酰氨凝膠電泳）分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。
樣品準(zhǔn)備條件：
細(xì)胞樣品：收集細(xì)胞后放入液氮中速凍保存或速凍24 h后轉(zhuǎn)入-80 °C冰箱保存。
組織樣品：動物組織一般取材后立即放入液氮中速凍保存，液氮凍存24 h后可轉(zhuǎn)入-80 °C冰箱保存。
所有樣品的處理和保存過程中，切忌反復(fù)凍融。
樣品運輸條件：樣品運輸條件根據(jù)實驗樣品的處理條件，可以選擇液氮或者干冰運輸。
您只需提供：新鮮且足量的樣品（組織不少于50 mg，細(xì)胞不少于106），或提取的總蛋白（≥ 50 μl），檢測蛋白信息，一抗（包括抗體說明書）（若無一抗，可有償使用公司備存抗體或代購）等。
我們提供：實驗結(jié)果原始膠片，電子版圖片，目的條帶光密度值，完成實驗報告單等。 |
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