河南專業(yè)科研細(xì)胞實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)掃描電鏡實(shí)驗(yàn)-效勝實(shí)業(yè)
效勝實(shí)業(yè)河南專業(yè)科研細(xì)胞實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)掃描電鏡實(shí)驗(yàn)
本公司開(kāi)展了石蠟包埋、石蠟切片、冰凍切片、HE染色，massson染色，PAS染色等染色，免疫組化，免疫熒光，WB .PCR.透射電鏡，掃描電鏡，細(xì)胞培養(yǎng)等實(shí)驗(yàn)服務(wù)一、服務(wù)介紹
掃描電鏡是1965年發(fā)明的較現(xiàn)代的細(xì)胞生物學(xué)研究工具，它具有制樣簡(jiǎn)單、放大倍數(shù)可調(diào)范圍寬、圖像的分辨率高、景深大等特點(diǎn)。近年來(lái)，掃描電鏡已廣泛地應(yīng)用在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、等學(xué)科的領(lǐng)域中。
二、實(shí)驗(yàn)原理
主要是通過(guò)發(fā)射電子聚焦光束來(lái)掃描樣品的表面形態(tài).電子束與樣品表面的樣子發(fā)生作用,產(chǎn)生多種能夠被檢測(cè)的信號(hào),這些信號(hào)就包含了樣品的表面形態(tài)和組成.染色。
三、實(shí)驗(yàn)流程
1. 樣品的初步處理
a.取材樣品面積可達(dá)8mm×8mm，厚度可達(dá)5mm。對(duì)于易卷曲的樣品如血管、胃腸道粘膜等，可固定在濾紙或卡片紙上，以充分暴露待觀察的組織表面。
b.樣品的清洗
(1)用等滲的生理鹽水或緩沖液清洗；
(2)用5%的蘇打水清洗；
(3)用超聲震蕩或酶消化的方法進(jìn)行處理。
c. 固定
固定所用的試劑和透射電鏡樣品制備相同，常用戊二醛及鋨酸雙固定。由于樣品體積較大，固定時(shí)間應(yīng)適當(dāng)延長(zhǎng)。也可用快速冷凍固定。
d. 脫水
樣品經(jīng)漂洗后用逐級(jí)增高濃度的酒精或丙酮脫水，然后進(jìn)入中間液，一般用醋酸異戊酯作中間液。
2. 樣品的干燥
a.空氣干燥法
空氣干燥法又稱自然干燥法，就是將經(jīng)過(guò)脫水的樣品，讓其暴露在空氣中使脫水劑逐漸揮發(fā)干燥。這種方法的較大優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)便易行和節(jié)省時(shí)間；它的主要缺點(diǎn)是在干燥過(guò)程中，組織會(huì)由于脫水劑揮發(fā)時(shí)表面張力的作用而產(chǎn)生收縮變形。因此，該方法一般只適用于表面較為堅(jiān)硬的樣品。
b. 冷凍干燥法
(1)置于冷凍保護(hù)劑中：將樣品置于冷凍保護(hù)劑中浸泡數(shù)小時(shí)。常用的冷凍保護(hù)劑為10%～20%二甲基亞砜水溶液，或15%～40%甘油水溶液。
(2)驟冷：將經(jīng)過(guò)保護(hù)劑處理的樣品迅速投入用液氮預(yù)冷至(150℃的氟利昂冷凍劑中，使樣品中的水分很快凍結(jié)。
(3)干燥：將已凍結(jié)的樣品移到冷凍干燥器內(nèi)已預(yù)冷的樣品臺(tái)上，抽真空，經(jīng)幾小時(shí)或數(shù)天后，樣品即達(dá)到干燥。本方法不需要脫水，避免了有機(jī)溶劑對(duì)樣品成分的抽提作用，不會(huì)使樣品收縮，也是較早使用的方法。但是，由于花費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)，消耗液氮多，容易產(chǎn)生冰晶損傷，因此未被廣泛應(yīng)用。
3. 樣品的導(dǎo)電處理(真空鍍膜法)
真空鍍膜法是利用真空膜儀進(jìn)行的。其原理是在高真空狀態(tài)下把所要噴鍍的金屬加熱，當(dāng)加熱到熔點(diǎn)以上時(shí)，會(huì)蒸發(fā)成極細(xì)小的顆粒噴射到樣品上，在樣品表面形成一層金屬膜，使樣品導(dǎo)電。噴鍍用的 |
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